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在关原之战开始的一年前，出云神社突然遭受了不明忍者的袭击，巫女伊佐那海也遭到灭门之祸。她在逃亡时被神秘人追杀，遇到了伊贺的忍者雾隐才藏，得其相救，从此对他一见倾心。得到了才藏的帮助的那海拜托才藏，带她去找信州上田城主的真田幸村帮忙，途中遇到甲贺忍者·猿飞佐助，原来猿飞已收归真田幸村麾下。这时正是真田幸村聚集十位同志的时候，集结于真田幸村麾下，天下无敌的军团即将诞生！

　　明治11年夏天，维新重臣大久保利通突遭暗杀。在这起事件背后，前维新志士志志雄真实（池田政典 配音）的身影渐渐浮现。当年他曾接任剑心担任刽子手，却最终遭到维新政府的背叛险致丧命。从地狱活转过来的志志雄，如今开始慢慢揭开“京都破坏计划”的黑幕。为了阻止志志颠覆明治政府的阴谋，密探集团——京都御庭番众的首领•翁交给遗孤少女卷町操（樱井智 配音）一项重要的任务，命她前去寻找曾经暗中支持着明治维新的刽子手拔刀斋——绯村剑心（凉风真世 配音）。操独自来到东海道，意外得知了心上人四乃森苍紫（安原义人 配音）的消息，